Η ιστορία ξεκινά όταν η ομάδα S.T.A.R.S. Alpha αποστέλλεται στα Arklay Mountains για να ερευνήσει την εξαφάνιση της Bravo Team. Μετά από επίθεση από μεταλλαγμένα πλάσματα, οι Chris Redfield, Jill Valentine, Barry Burton και Albert Wesker βρίσκουν καταφύγιο σε μια απομονωμένη έπαυλη. Εκεί ανακαλύπτουν ότι η έπαυλη είναι γεμάτη ζόμπι, παγίδες και βιολογικά όπλα, αποτέλεσμα πειραμάτων της Umbrella Corporation. Καθώς οι παίκτες εξερευνούν το αρχοντικό, λύνουν γρίφους, συλλέγουν αντικείμενα και αποκαλύπτουν την προδοσία του Wesker και την ύπαρξη του Tyrant, ενός πανίσχυρου βιολογικού όπλου.

Το gameplay παραμένει πιστό στο remake του GameCube, με fixed camera angles, tank controls και έμφαση στη διαχείριση πόρων. Η έκδοση για Wii προσθέτει δυνατότητα χειρισμού με το Wii Remote και το Nunchuk, προσφέροντας εναλλακτικό τρόπο στόχευσης και αλληλεπίδρασης. Το παιχνίδι περιλαμβάνει επίσης Crimson Head zombies, defensive weapons και εναλλακτικά σενάρια ανάλογα με τις επιλογές του παίκτη.