Povestea începe atunci când echipa S.T.A.R.S. Alpha este trimisă în Munții Arklay pentru a investiga dispariția echipei Bravo. După un atac al unor creaturi mutate, Chris Redfield, Jill Valentine, Barry Burton și Albert Wesker găsesc refugiu într-o casă izolată. Acolo descoperă că vila este plină de zombi, capcane și arme biologice, rezultat al unor experimente ale Umbrella Corporation. Pe măsură ce jucătorii explorează conacul, rezolvă puzzle-uri, colectează obiecte și dezvăluie trădarea lui Wesker și existența Tyrantului, unei arme biologice extrem de puternice.
Gameplay-ul rămâne fidel remake-ului de pe GameCube, cu unghiuri fixe ale camerei, control de tip tank și accent pe gestionarea resurselor. Versiunea pentru Wii adaugă posibilitatea de control cu Wii Remote și Nunchuk, oferind o metodă alternativă de țintire și interacțiune. Jocul include, de asemenea, zombi Crimson Head, arme defensive și scenarii alternative în funcție de alegerile jucătorului.
